سپیکٹروفٹو میٹر کے عام اجزاء کے اصول اور اطلاق کا تعارف

حیاتیاتی ، کیمیائی ، طبی اور ماحولیاتی تحقیق میں سپیکٹرو فوٹومیٹر بڑے پیمانے پر استعمال ہوتا ہے۔
سپیکٹرو فوٹومیٹری یہ پیمائش کرتی ہے کہ ایک کیمیکل کیمیکل روشنی کو ایک سپیکٹروفاٹومیٹر میں نمونے کے ذریعے روشنی کی روشنی کو کس حد تک جذب کرسکتا ہے۔
کھوج کی روشنی کی شدت کی پیمائش کرکے ، نمونہ میں محلول کی حراستی کا تعین کرنے کے لئے اس طریقے کا استعمال کیا جاسکتا ہے۔
سپیکٹرو فوٹومیٹری کا تصور
نمونہ کو بھیجی گئی بیم میں فوٹوون بیم ہوتا ہے۔
جب فوٹوون نمونے میں انووں سے ملتے ہیں تو ، انو ان میں سے کچھ جذب کرسکتے ہیں ، بیم میں فوٹوون کی تعداد کو کم کرسکتے ہیں اور پتہ لگانے والے اشارے کی شدت کو کم کرسکتے ہیں۔
ٹرانسمیٹینس نمونے سے گزرنے والی روشنی کا ایک حصہ ہے۔ اس کی وضاحت اس واقعے کی روشنی کی شدت میں نمی سے گزرنے والی روشنی کی شدت کے طور پر کی گئی ہے۔
جاذب ٹرانسمیٹینس کے برعکس ہے ، جس کی مناسبت سپیکٹروفاٹومیٹر سے ماپا جاتا ہے۔
جاذب کے مطابق ، حل لیمبرٹ قانون سے حل نمونہ کی حراستی کا تعین کیا جاسکتا ہے ، جس سے پتہ چلتا ہے کہ جاذب اور نمونہ حراستی کے مابین لکیری رشتہ ہے۔ بیئر لیمبرٹ قانون کے مطابق ، جاذب جذب جذب کی پیداوار ہے ، جو کسی طول موج اور جس فاصلے سے روشنی گزرتی ہے اس میں محلول کے ذریعے جذب کی جانے والی روشنی کی پیمائش ہے۔ نمونہ ، یا سفر کا فاصلہ ، اور اجتماعی حراستی۔ عام طور پر ، جاذب کی پیمائش کا مقصد نمونے کی حراستی کی پیمائش کرنا ہے۔
سپیکٹروفوٹو میٹر کے اجزاء
ہر سپیکٹرو فوٹومیٹر ایک روشنی ماخذ ، ایک کولیمیٹر (لینس یا مضبوط اور سیدھے بیموں کو منتقل کرنے کے لئے ایک فوکس کرنے والا آلہ) ، مختلف طول موج کے بیم کو الگ کرنے کے لئے ایک مونوکرومیٹر ، اور مطلوبہ طول موج کی لہر یا نالی کو منتخب کرنے کے ل a لمبائی سلیکٹر پر مشتمل ہوتا ہے۔ اس ویڈیو میں پیش کردہ سپیکٹرو فوٹومیٹر میں روشنی کی طول موج الٹرا وایلیٹ اور مرئی روشنی کی حد میں ہے۔ سپیکٹرو فوٹومیٹر میں نمونہ رکھنے والا ، فوٹو ڈیکٹر اور ایک اسکرین بھی شامل ہے جس میں ڈٹیکٹر کے نتائج دکھائے جاتے ہیں۔
سب سے حالیہ سپیکٹرو فوٹومیٹر براہ راست ایک کمپیوٹر سے جوڑا جاتا ہے ، جہاں تجرباتی پیرامیٹرز کو کنٹرول کیا جاسکتا ہے اور نتائج ظاہر ہوتے ہیں۔
سپیکٹروفوٹو میٹر کا کام کرنے کا اصول
جب آپ سپیکٹرو فوٹومیٹری کو انجام دیتے ہیں تو ، اس کے لئے ضروری ہے کہ مناسب احتیاطی تدابیر اختیار کریں ، جیسے دستانے پہننا ، جس طرح سے آپ حیاتیاتی یا کیمیائی حل استعمال کرتے ہیں اس پر منحصر ہے۔
آلے کو آن کریں اور نمونے کے UV-Vis سپیکٹرم کی پیمائش کرنے سے پہلے چراغ اور الیکٹرانکس کو گرم ہونے دیں۔
ایک ہی حل کا ایک خالی نمونہ ایک ہی پییچ اور اسی طرح کی آئنک طاقت کے ساتھ تیار کریں ، لیکن اجزاء کے تجزیہ کیے بغیر۔ چونکہ کیوٹیٹ اور سالوینٹ روشنی کو منتشر کرسکتے ہیں ، اس لئے نمونے کا تجزیہ کرنا ضروری ہے۔
روایتی سپیکٹرو فوٹومیٹر نمونہ ہولڈر پلاسٹک اور کوارٹج پیالوں کے انعقاد کے لئے ڈیزائن کیا گیا ہے۔ ایک پیالے میں اصل حل پِپیٹ کریں۔
انگلیوں کے نشانات کو صاف کرنے اور پیالے کے باہر پر چھڑکنے کے بعد ، نمونے لینے والے میں کیوٹ کو صحیح طریقے سے داخل کریں اور ڑککن کا دروازہ بند کردیں۔
کبھی بھی دروازہ بند کرنا مت بھولیئے کیونکہ کھلی سپیکٹرو فوٹومیٹر سے یووی تابکاری آپ کی آنکھوں اور جلد کو نقصان پہنچا سکتی ہے۔
مطلوبہ طول موج یا طول موج کی حد کو پروگرام کریں جو نمونے میں منتقل ہوجائے گی۔ اس کا انحصار بہترین طول موج پر ہے جس کا تجزیہ کیا جارہا جزو جذب کرسکتا ہے۔ اس کے بعد خالی نمونے کی پیمائش کرکے مشین صفر کردی گئی ہے ، جو نمونے کے بفر کی وجہ سے نیچے جذب کو منہا کرتی ہے۔
آپ جس طرح کے سپیکٹرو فوٹومیٹری تجربہ کر رہے ہیں اس پر انحصار کرتے ہوئے ، نمونہ کی پیمائش سے قبل ایک معیاری وکر تیار کرنا ضروری ہوسکتا ہے ، جہاں سے نمونے میں تجزیہ کردہ مرکب کی حراستی کا تعین کیا جاسکتا ہے۔
نمونے کو مناسب درجہ حرارت تک پہنچنے دیں اور بلبلوں کو متعارف کرانے سے بچنے کے لئے آہستہ سے مکس کریں۔ اس کے بعد نمونے کو براہ راست مشین کے اندر کٹوری میں شامل کیا جاسکتا ہے اور پڑھائی کی جاسکتی ہے۔
نمونے کو جذب کے ل for ماپنے کے بعد ، تجربہ کا صحیح اندازہ لگایا جاتا ہے۔ مثال کے طور پر ، حراستی یا ینجائم سرگرمی کی سطح کا تعین کرنے کے لئے۔
سپیکٹرو فوٹومیٹر کا استعمال
سپیکٹروفاٹومیٹر کے عام استعمال میں سے ایک سیل کثافت کی پیمائش کرنا ہے۔ خلیوں کی کثافت کی پیمائش بیکٹیریا کی لاجوردھمک نمو وکر پیدا کرنے کے لئے استعمال کی جاسکتی ہے ، جس سے ریکومبیننٹ پروٹین کے انضمام کے لئے زیادہ سے زیادہ وقت کا تعین کیا جاسکتا ہے۔
کیمیائی رد عمل کی شرح کو ماپنے کے لئے بھی اسپیکٹروفوٹو میٹر کا استعمال کیا جاسکتا ہے۔ اس مجسمے میں ، جذب انزیمائٹک رد عمل کی نگرانی کے لئے استعمال کیا جاتا ہے ، جو وقت کے ساتھ 452nm کے انٹرمیڈیٹ رد عمل کے ذریعے غائب ہوجاتا ہے۔ اس انزیمیٹک اقدام کی شرح کا اندازہ مناسب مساوات کے ساتھ اعداد و شمار کے ملاپ سے کیا جاسکتا ہے۔
مائکرو سپیکٹرو فوٹومیٹر کا تعارف نمونہ رکھنے والوں کی ضرورت کو ختم کرتا ہے۔ یہ سپیکٹرو فوٹومیٹر نمونے کو برقرار رکھنے کے لئے سطحی تناؤ کا استعمال کرتے ہیں۔
پروٹین اور نیوکلک ایسڈ سمیت بایومولیکولس جیسے چھوٹے اور مہنگے نمونوں کے بڑے پیمانے پر اور حراستی کی پیمائش کے لئے مائکرو اسپیکٹرو فوٹومیٹر بہترین انتخاب ہے۔
280nm پر پروٹینوں کی جاذبیت ٹرپٹوفن ، ٹائروسین اور فینیلالانین میں پائی جانے والی خوشبودار سائیڈ چینز کے مواد پر منحصر ہے ، اسی طرح دو سیسٹینز کے مابین ڈسلفائڈ بانڈ بھی ہے۔
پروٹین کی حراستی کا تعین اس کے جذب سے 280nm اور اس کے جذب کے گتانک سے کیا جاسکتا ہے ، جو امینو ایسڈ کی تشکیل پر مبنی ہے۔
ڈی این اے اور آر این اے میں زیادہ سے زیادہ جذب 260nm پر ہوتا ہے ، جہاں سے ان کی حراستی کا تعین کیا جاسکتا ہے۔ نیوکلیک ایسڈ کی پاکیزگی کا جائزہ بھی جاذب ریڈنگ کے تناسب سے لے کر مخصوص طول موج میں ہوسکتا ہے۔