سپیکٹروفیٹومیٹکیک رنگائیٹک پروٹین کی مقدار
پروٹین عام طور پر پروٹین کا ایک مرکب ہیں. Colorimetric assays پروٹین کے اجزاء پر مبنی ہیں: امینو ایسڈ (مثال کے طور پر، ٹائروسنین، سیرین) ایک اضافی کرومیجینک گروہ یا رنگ رنگ کے مواد کو پیدا کرنے کے ساتھ ردعمل. رنگ کے مواد کی حراست میں براہ راست امینو ایسڈ کی تعداد سے منسلک ہوتا ہے جس میں پروٹین کا رد عمل ہوتا ہے، اس طرح پروٹین کی حراستی کو ظاہر ہوتا ہے.
رنگمیٹک طریقہ
بی سی اے، بریڈفورڈ، اور لوٹری جیسے کئی طریقوں ہیں.
لوٹری کا طریقہ: ابتدائی بیوروٹ ردعمل اور بہتر کی بنیاد پر. پروٹین کو ایک نیلے رنگ کے رد عمل کی پیداوار کے لئے Cu2 کے ساتھ منسلک ہوتا ہے. تاہم، بیوریٹ کے مقابلے میں کمری کا طریقہ زیادہ حساس ہے. نقصان یہ ہے کہ ترتیب میں کئی مختلف ریجینٹ شامل ہیں؛ ردعمل ایک طویل وقت لگتا ہے؛ غیر پروٹین مادہ کے لئے حساس ہے؛ EDTA، ٹرتون ایکس 100، اور امونیا سلفیٹ مشتمل پروٹین اس طریقے کے لئے مناسب نہیں ہیں.
Bicinchoniinine ایسڈ ہمت: یہ ایک نیا، زیادہ حساس پروٹین ہمت ہے. کاک پیدا کرنے کے لئے ایک الکلین کے حل میں Cu2 کے ساتھ تجزیہ کیا جا سکتا ہے پروٹین، جس میں BC2 کے ساتھ 562 نمی جذباتی چوٹی کے ساتھ ایک جامنی مرکب بنانے کے لئے ایک chelate بناتا ہے. اس کمپاؤنڈ اور پروٹین کی حراستی کے درمیان لکیری رشتہ بہت مضبوط ہے، اور اس کا رد عمل بہت مستحکم ہوتا ہے. لوٹری کے طریقہ کار سے تعلق رکھنے والے، آپریشن آسان ہے اور حساسیت زیادہ ہے. تاہم، لوٹری کے طریقہ کار کی طرح، یہ پروٹین اور ڈٹرجنٹ کے ساتھ مداخلت کے لئے حساس ہے.
برڈفورڈ کا طریقہ: اس طریقہ کار کا اصول یہ ہے کہ پروٹین کو ایک رنگ کے مرکب پیدا کرنے کے لئے کوومیسی بہت خوب بلیو سے منسلک ہوتا ہے جو 595 این ایم جذب کرتا ہے. اس کی سب سے بڑی خصوصیت اس کی سنویدنشیلتا ہے، جس میں 2 بار لوری اور بی سی اے کی ہے. یہ آسان اور تیز ہے. یہ صرف ایک قسم کی ردعمل کی ضرورت ہے. کمپاؤنڈ ایک گھنٹہ کے لئے مستحکم ہوسکتا ہے جس کے نتیجے میں سہولت حاصل ہو. لوٹری کے ساتھ مداخلت، بی سی اے ایجنٹوں کو کم کرنے کے ساتھ رد عمل کرتا ہے (مثال کے طور پر ڈی ٹی ٹی، mercaptoethanol) ہم آہنگ. تاہم، یہ اب بھی ڈٹرجنٹ کے ساتھ حساس ہے. اہم خرابی یہ ہے کہ مختلف معیار ایک ہی نمونے کے نتائج اور بڑے پیمانے پر نتائج کے نتیجے میں بڑے اختلافات پیدا کرسکتے ہیں.
کچھ محققین جو پہلی بار رنگنیٹکک پیمائش پر سامنے آتے ہیں، مختلف رنگمیٹک ٹیسٹ کے نتائج کی طرف سے الجھن ہوسکتے ہیں. آپ کو الجھن میں کیا خیال ہے؟ حقیقت یہ ہے کہ گروہوں نے مختلف طریقوں سے رد عمل کیا ہے اور کرومیوجنک گروہ ایک ہی نہیں ہیں، کئی طریقوں کے ساتھ ساتھ اسی نمونہ کے نمونے کی نمائش کرنے کے لئے کئی طریقے استعمال کیے جاتے ہیں. مثال کے طور پر، کیلر اور ایل. انسانی دودھ میں پروٹین کا تجربہ کیا اور پایا کہ کمری اور بی سی اے کی طرف سے ماپنے کی توجہ مرکوز بریڈفورڈ کے مقابلے میں کافی زیادہ تھی. فرق اہم تھا. یہاں تک کہ اگر ایک ہی نمونے کا تعین کیا جاتا ہے، اسی رنگیمیٹک طریقہ کی طرف سے منتخب معیاری نمونہ متضاد ہے، اور ٹیسٹ کے بعد حراستی بھی متضاد ہے. مثال کے طور پر، 1.34 ملی گرام / ملی میٹر کی حراستی اور 2.64 ملی گرام / ملی میٹر کی حراستی کے ساتھ ایک معیاری معیار کے طور پر گلوبلین کے طور پر، ایک معیار کے طور پر بی ایم اے کا استعمال کرتے ہوئے، سیل homogenate میں پروٹین کی جانچ کرنے کے لئے کمری کا استعمال کریں. لہذا، رنگائیکریٹ طریقہ کا انتخاب کرنے سے قبل، نمونہ کی کیمیکل ساخت کا حوالہ دینے کے لئے یہ بہتر ہے کہ ایک معیار کے طور پر کیمیکل طور پر ایک ہی معیاری پروٹین تلاش کریں. اس کے علاوہ، پروٹین کو کم کرنے کے لئے رنگیمیٹک طریقہ اکثر اس طرح کے مسائل کا سبب بنتا ہے کہ نمونہ کے جذباتی قیمت بہت کم ہے، نتیجے میں نمونہ نمونہ حراستی اور اصل حراستی کے درمیان بڑا فرق ہے. اہم مسئلہ یہ ہے کہ 1011 اسپیکٹروفوٹومیٹر، کویوٹ کے اہم حصے کا رنگ ایک خاص نصف زندگی ہے، لہذا ہر رنگمیٹک طریقہ رد عمل کے ٹائم ٹائم کی فہرست کرتا ہے. تمام نمونے (معیاری نمونے سمیت) اس وقت کے اندر ٹیسٹ کرنا لازمی ہے. اگر وقت بہت لمحہ ہے تو، جذب قیمت حاصل ہوتی ہے جس میں چھوٹا ہوتا ہے اور بدلتی ہوئی حراستی قدر کم ہوتی ہے. اس کے علاوہ، رد عمل کے درجہ حرارت، حل کے پی ایچ کی قیمت، وغیرہ تمام اہم عوامل ہیں جو تجربے پر اثر انداز کرتے ہیں. اس کے علاوہ، پلاسٹک کا رنگمیٹری استعمال کرنے کے لئے یہ بہت ضروری ہے. کوارٹج یا شیشے کی بناوٹ سے استعمال ہونے سے بچیں، کیونکہ ردعمل کے بعد رنگ کو کوارٹج یا شیشے کا رنگ بنائے گا، جس کا نتیجے نمونے کی غلط جذباتی ہے.
کمپنی سپیکٹروفوٹ میٹر کی فروخت میں مہارت رکھتا ہے، جو خوش آمدید گاہکوں کو مشورہ اور خریداری کرنے کی ضرورت ہے، ہم آپ کو مخلص خدمت اور معیار کی مصنوعات کے ساتھ ساتھ کم قیمتوں میں فراہم کرے گا.
ای میل: info@sumerlab.com
ویب: sumerinstrument.com